难转化底盘从零搭建遗传操作与编辑体系
项目背景
部分经济与药用真菌（如低产孢、难转化的虫草近缘种）缺乏公开可用的转化与编辑体系。客户需要从零建立可复用的遗传操作平台，将“不能转”的底盘变成可常规编辑的工具菌。
目标菌株
以低产孢、难转化的丝状真菌底盘为对象，常规分生孢子路线难以作为受体，需以菌丝体为转化单元进行体系搭建。
编辑策略
- 原生质体制备与再生优化：优化酶解体系、渗透压稳定剂与再生培养基，提升原生质体得率与再生率。
- 转化路线比选：在 PEG 原生质体转化与农杆菌介导转化（ATMT）之间择优，必要时组合使用。
- 复制子与筛选标记：筛查内源隐秘质粒复制子；验证营养缺陷型标记（ura3、pyrG、argB）及抗生素标记（潮霉素、诺丝菌素、博来霉素）的可用性。
- CRISPR 骨架适配：在建立转化的基础上，导入密码子优化的 Cas9 与 gRNA 表达盒，完成首个基因编辑事件验证。
交付成果
- 可稳定重复转化的受体系统
- 适配目标菌株的 CRISPR 编辑骨架与筛选标记方案
- 完整项目 SOP，支持客户后续自主开展多轮编辑
案例图片
