基因编辑价目与优惠
Cas9 RNP + 同源臂精准编辑 · 真菌 / 酵母 / 食用菌 · 分转化部分满五送一
Cas9 RNP + 同源臂 · 精准基因编辑服务
面向真菌 / 酵母 / 食用菌的物种级编辑方案,避开宿主启动子识别差异、显著降低脱靶,在 100+ 种微生物底盘上稳定交付基因型明确的敲除、点突变与标签插入突变株。
标准工艺 · RNP + 同源臂
传统 CRISPR 编辑常常受困于宿主 NHEJ 效率、转化效率低、重组子纯度不足三个瓶颈。我们把 Cas9 蛋白和 gRNA 在体外预先组装成 RNP,与携带 50–1000 bp 同源臂的供体 DNA 一起送进细胞,转化后以抗性标记正向筛选、多轮单克隆纯化,最终交付基因型明确、无杂菌污染的突变株。
体外 RNP
Cas9 蛋白 + 高纯度 sgRNA 体外 37℃ 孵育 15 min 形成活性复合物,避开宿主启动子识别差异,剂量可控、瞬时作用、零整合风险。
同源臂供体
供体 DNA 携带 50–1000 bp 同源臂,单链/双链按底盘选择;用于基因敲除、点突变、标签插入与定点整合,序列可在合同里完整披露。
感受态适配
针对每个底盘预设感受态制备方案——酵母 LiAc/SS-carrier、毕赤酶解+LiAc、念珠菌电转、丝状真菌原生质体 PEG/电转、食用菌农杆菌 ATMT 备援。
抗性筛选 · 纯化保真
转化后以抗生素抗性标记做正向筛选,配合多轮单克隆/单孢分离纯化,PCR 与 Sanger 测序双重验证,杜绝杂菌与异核体残留,交付菌株纯度可控、便于工业放大。
对丝状真菌我们仍保留 ATMT、PEG-原生质体与电转三套备援方案,对 NHEJ 效率偏低的菌株(如部分念珠菌、新型曲霉)会通过 RNP 表达时长、同源臂 GC 调整或加损伤诱导策略做补偿。
服务价目
以下为常见菌株在三种改造类型下的单基因转化费用(人民币),已包含 RNP 制备、同源臂供体、抗性标记筛选、多轮纯化与 PCR/测序验证等"把改造做进菌株"的全流程转化工序。分离株及特殊菌株的报价见下方"分离株专区"。
酵母类
覆盖工业酵母、非常规酵母、念珠菌、隐球菌、汉逊酵母等常规底盘。
| 属 | 中文名 | 拉丁学名 | 基因敲除 | 致死 CRISPR down | 过表达 |
|---|---|---|---|---|---|
| 克鲁维酵母属 | 马克思克鲁维酵母 | Kluyveromyces marxianus | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 乳酸克鲁维酵母 | Kluyveromyces lactis | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 念珠菌属 | 热带念珠菌 | Candida tropicalis | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 白色念珠菌 | Candida albicans | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 近平滑念珠菌 | Candida parapsilosis | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 产朊假丝酵母 | Candida utilis | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 中间假丝酵母 | Candida intermedia | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 其他念珠菌 | Candida spp. | ¥19,800 起 | ¥15,600 起 | ¥12,600 起 | |
| 耶氏酵母属 | 解脂耶氏酵母 | Yarrowia lipolytica | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 隐球菌属 | 新生隐球菌 | Cryptococcus neoformans | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 浅白隐球菌 | Cryptococcus gattii | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 | |
| 汉逊酵母属 | 汉逊酵母 | Ogataea polymorpha | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 接合酵母属 | 鲁氏酵母 | Zygosaccharomyces rouxii | ¥19,800 | ¥15,600 | ¥12,600 |
| 酿酒酵母属 | 酿酒酵母 | Saccharomyces cerevisiae | ¥9,600 | ¥9,600 | ¥4,800 |
| 毕赤酵母属 | 毕赤酵母 | Komagataella phaffii | ¥9,600 | ¥9,600 | ¥4,800 |
丝状真菌 · 霉菌
覆盖红曲霉、青霉、曲霉、木霉等工业丝状真菌,覆盖 ATMT、原生质体 PEG、电转三种转化路线。
| 属 | 中文名 | 拉丁学名 | 基因敲除 | 致死 CRISPR down | 过表达 |
|---|---|---|---|---|---|
| 红曲霉属 | 红曲霉 | Monascus ruber | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 |
| 紫红曲霉 | Monascus purpureus | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 曲霉属 | 构巢曲霉 | Aspergillus nidulans | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 |
| 土曲霉 | Aspergillus terreus | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 烟曲霉 | Aspergillus fumigatus | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 黑曲霉 | Aspergillus niger | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 黄曲霉 | Aspergillus flavus | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 青霉属 | 产黄青霉 | Penicillium chrysogenum | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 |
| 绳状青霉 | Penicillium funiculosum | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 扩展青霉 | Penicillium expansum | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 二指青霉 | Penicillium digitatum | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 抱青霉 | Penicillium nalgiovense | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 杂色曲霉 | Aspergillus versicolor | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 木霉属 | 深绿木霉 | Trichoderma atroviride | ¥21,600 | ¥17,400 | ¥14,400 |
| 长枝木霉 | Trichoderma longibrachiatum | ¥21,600 | ¥17,400 | ¥14,400 | |
| 哈茨木霉 | Trichoderma harzianum | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 里氏木霉 | Trichoderma reesei | ¥21,600 | ¥17,400 | ¥14,400 |
食用菌 · 病原菌 · 其他
食用菌默认走农杆菌 ATMT 路线,临床/田间病原菌按 BSL-1/2 标准操作。
| 类群 | 中文名 | 拉丁学名 | 基因敲除 | 致死 CRISPR down | 过表达 |
|---|---|---|---|---|---|
| 植物病原菌 | 植物炭疽 | Colletotrichum gloeosporioides | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 |
| 番石榴 | Colletotrichum acutatum | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 拟茎点霉菌 | Phomopsis capsici | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 稻瘟病菌 | Magnaporthe oryzae | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 镰刀菌 | Fusarium graminearum | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 稻曲病菌 | Ustilaginoidea virens | ¥19,800 | ¥16,200 | ¥13,200 | |
| 其他植物病原菌 | Phytopathogen (on request) | ¥21,600 ~ ¥36,000 | ¥17,400 ~ ¥28,800 | ¥14,400 ~ ¥24,000 | |
| 盖氏菌属 | 红色毛癣菌 | Trichophyton rubrum | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 |
| 阿萨希毛孢子菌 | Trichosporon asahii | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 马尔尼菲蓝状菌 | Talaromyces marneffei | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 其他菌丝状菌 | Filamentous fungi (on request) | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 | |
| 白僵菌属 | 球孢白僵菌 | Beauveria bassiana | ¥23,400 | ¥18,600 | ¥15,600 |
| 子实体型真菌 | 金针菇 | Flammulina velutipes | ¥25,200 | ¥20,400 | ¥16,800 |
| 双孢菇 | Agaricus bisporus | ¥25,200 | ¥20,400 | ¥16,800 | |
| 香菇 | Lentinula edodes | ¥25,200 | ¥20,400 | ¥16,800 | |
| 灵芝 | Ganoderma lucidum | ¥25,200 | ¥20,400 | ¥16,800 | |
| 蛹虫草 | Cordyceps militaris | ¥26,100 | ¥21,000 | ¥17,400 | |
| 其他酵母型 | 如扣囊酵母、圆红冬孢酵母等 | on request | ¥9,600 起 | ¥9,600 起 | ¥4,800 起 |
分离株专区 首基因 +30%
客户从临床、环境、土壤、植物、发酵液等分离获得的野生型菌株,需要先做菌种确认、生理条件摸索、Cas9 灵敏度测试与转化体系重建,首个基因位点加收 30%(含体系建立费),自第二个位点起按对应常见菌株参考价执行。
| 类群 | 名称 | 拉丁学名 | 基因敲除(首基因) | 致死 CRISPR down(首基因) | 过表达(首基因) |
|---|---|---|---|---|---|
| 念珠菌属 | 耳念珠菌(BSL-2)分离 | Candida auris | ¥25,800 | ¥20,300 | ¥16,400 |
| 念珠菌属 | 其他假丝酵母 分离 | Candida spp. | ¥25,800 起 | ¥20,300 起 | ¥16,400 起 |
| 曲霉属 | 其他曲霉 分离 | Aspergillus spp. | ¥28,100 起 | ¥22,700 起 | ¥18,800 起 |
| 木霉属 | 其他木霉 分离 | Trichoderma spp. | ¥28,100 起 | ¥22,700 起 | ¥18,800 起 |
| 植物病原菌 | 其他植物病原菌 分离 | Phytopathogens | ¥28,100 起 | ¥22,700 起 | ¥18,800 起 |
| 菌丝状菌 | 其他菌丝状菌 分离 | Filamentous fungi | ¥28,100 起 | ¥22,700 起 | ¥18,800 起 |
| 子实体型真菌 | 其他食用菌 分离 | Macrofungi | ¥32,800 起 | ¥26,500 起 | ¥21,900 起 |
夏季限时 · 分转化部分满五送一
同一项目内"分转化部分"费用(即按每个基因位点独立计费的转化、筛选、验证等工序)每累计 5 个位点,送 1 个免费位点(按价目表对应类型的中位价计),可与分离株加价叠加使用。
真菌转座子随机突变体库构建
除定点编辑外,我们同时承接真菌的转座子随机突变体库构建:利用 AC/Ds 或 PiggyBac(PB)转座子系统在基因组上产生大容量、近随机的插入突变,用于功能基因筛选、必需基因鉴定与表型组学。我们采用转座子介导的插入,而非依赖农杆菌 T-DNA 插入体系——规避 T-DNA 偏好性整合、多拷贝串联与边界删除等问题,插入更趋随机、背景更干净。适用底盘覆盖酵母、丝状真菌与食用菌。
AC/Ds 转座系统
源于玉米的天然双元件转座子,Ds 元件在 Ac 转座酶驱动下于非同源位点随机切接,产生稳定单拷贝插入,适合构建覆盖度可控的插入突变库。
PiggyBac(PB)
TTAA 靶点、可精确切除/再插入的万能转座子,转座效率高、插入位点近随机,是真菌功能基因组学大规模突变体库的主流选择之一。
非 T-DNA 插入
采用转座子介导的随机插入,不依赖农杆菌 T-DNA 插入。相比 T-DNA,插入谱更均匀、单拷贝比例更高,更适合大规模正向遗传筛选。
位点鉴定与验证
突变体库配 splinkerette PCR/半随机 PCR 与高通量测序(Tn-seq)定位插入位点,交付代表性克隆的 Sanger 验证,确保突变谱与覆盖度可信。
与定点编辑互补
定点编辑(RNP + 同源臂)解决"我想精准改哪个基因",转座子随机突变库解决"哪些基因与某表型相关"。两种策略可组合:先用转座子库做正向遗传筛选锁定候选基因,再用 RNP 做精准回补与验证。
服务流程
从询价到交付的全过程,文档和菌株双线并行,所有节点双方留痕。标准项目自材料齐备起 1 ~ 4 个月交付,具体周期在评估阶段随报价一并确认。
项目评估
1-2 工作日。菌株背景确认、靶基因序列评估、RNP 切割位点预筛。
合同与材料
签订保密协议 + 服务合同;客户寄送菌株、质粒(如有)或提供序列。
RNP 编辑
体外组装 RNP + 同源臂共转化,抗性标记正向筛选、多轮单克隆/单孢纯化与复筛。
交付
突变体甘油管 2 支、PCR 与 Sanger(必要时 NGS)验证报告、原始数据与序列比对图。
典型应用场景
从代谢工程底盘改造到致病机制研究,覆盖工业、教育、医疗、农业等下游用途。
工业菌株迭代
提升酿酒酵母、毕赤、里氏木霉的生产强度,去除副产物通路,构建稳定的工业级底盘。
致病机制研究
在烟曲霉、新生隐球菌、白色念珠菌等病原菌中精准敲除毒力基因,研究宿主-病原互作。
食用菌育种
金针菇、香菇、灵芝、蛹虫草等品种改造,纤维降解、抗逆、活性成分相关通路定向编辑。