转座子突变体库构建与 cubes-seq 插入位点鉴定
项目背景
客户需构建大规模随机突变体文库，用于解析基因功能、筛选关键表型。传统全基因组重测序定位插入位点成本高、周期长，难以支撑高通量筛选。
技术路线
- 突变体库构建：根据菌株特性选择 mariner/Tn5 等转座子系统，构建覆盖度足够的随机插入突变体库。
- 单克隆挑取与保存：自动化挑取单克隆并建立 96 孔板保存体系。
- 插入位点鉴定：以自主研发的 cubes-seq 技术替代常规重测序，快速、低成本确定转座子插入位点。
- Tn-Seq 分析：结合表型筛选与插入位点统计，定位候选关键基因。
交付成果
- 覆盖度达标的高质量转座子突变体库
- 单克隆库与插入位点鉴定报告
- cubes-seq 数据与 Tn-Seq 分析结果
- 突变体鉴定成本与周期显著下降，高效锁定目标基因
案例图片
Tn-seq 测序结果（cubes-seq 差异分析示例）
以下四图由本司 Tn-seq 分析工作台基于内置示例数据集（M. abscessus ATCC 19977 前 500 kb 精简版，529 个基因；对照组 / 实验组各 3 个生物学重复）生成的标准交付图表，展示结果报告的完整形态：文库质量 → 差异基因 → 通路富集。统计方法为 TRANSIT 风格 Resampling 置换检验（TA 位点 × 重复单元精确置换）+ TTR 截尾总读数归一化，支持环状法（circularization）建库数据直接输入。实际项目将替换为客户真实数据与真实 KEGG 注释。
