真菌T-DNA突变体文库构建
T-DNA 随机插入突变体库是研究真菌基因功能的正向遗传学利器。锐志魔方依托根癌农杆菌介导转化（ATMT）技术，为曲霉、青霉、镰刀菌、炭疽菌及大型食用菌等构建覆盖全基因组的高质量 T-DNA 插入突变体库，并提供侧翼序列鉴定服务。
一、ATMT 与 T-DNA 插入机制
根癌农杆菌 Ti 质粒上的 T-DNA 片段在 vir 基因产物作用下可随机整合到宿主真菌染色体中，破坏对应基因区域。ATMT 已成功应用于烟曲霉、稻瘟病菌、尖孢镰刀菌、申克氏孢子丝菌等多种丝状真菌，是建立大型突变体库的核心方法。
二、经典建库案例
- 尖孢镰刀菌 T-DNA 突变体库：筛选致病与形态相关突变体；
- 稻瘟病菌插入突变体库：定位致病相关基因；
- 烟曲霉耐药突变体库：通过 T-DNA 插入阐明耐药机制；
- 香菇、金针菇等大型真菌：构建食用真菌性状改良突变体库。
三、技术优势
- 自主改进了多类真菌遗传转化工具质粒；
- 自有 cubes-seq 技术可快速鉴定 T-DNA 片段整合位点；
- 严格的质控标准，确保突变株整合位点的均一性；
- 可实现 Tn-seq 高通量测序，为文库鉴定提供技术保障。
四、可承接真菌类群
| 分类 | 可承接真菌 |
|---|---|
| 酵母型真菌 | 毕赤酵母、酿酒酵母、白念珠菌、隐球菌、阿萨希毛孢子菌、马尔尼菲蓝状菌 |
| 丝状真菌 | 曲霉属、青霉属、镰刀菌、植物炭疽菌 |
| 大型真菌 | 香菇、双孢蘑菇、金针菇等 |
| 其他 | 具体可咨询定制 |
五、参考文献
- Feng J, Li T, Zhang X, et al. Efficient production of polymalic acid from xylose mother liquor by a T-DNA-based mutant of Aureobasidium pullulans. Applied Microbiology and Biotechnology, 2019, 103(16): 6519-6527.
- Xu L, Chen W. Random T-DNA Mutagenesis Identifies a Cu/Zn Superoxide Dismutase Gene as a Virulence Factor of Sclerotinia sclerotiorum. Molecular Plant-Microbe Interactions, 2013, 26(4): 431-441.
- Simon U, Pflug F G, Alexandra S, et al. In vivo insertion pool sequencing identifies virulence factors in a complex fungal–host interaction. PLoS Biology, 2018, 16(4): e2005129.
- Liu Y, Koh C M J, Yap S A, et al. Identification of novel genes in the carotenogenic and oleaginous yeast Rhodotorula toruloides through genome-wide insertional mutagenesis. BMC Microbiology, 2018, 18(1): 14.