细菌过表达株构建

细菌过表达株构建是合成生物学、蛋白表达、荧光示踪与功能验证的核心工具。锐志魔方根据外源基因与宿主基因组的相对位置，提供游离质粒、随机整合、定点整合三类过表达方案，已在数十种细菌中建立稳定转化体系。

一、三类过表达策略

  • 游离质粒过表达：外源基因位于独立复制子质粒，构建周期短，适合短期诱导表达或筛选；遗传稳定性取决于质粒复制压力与选择标记；
  • 随机整合过表达：通过 Himar1/Tn5 等转座子将表达盒随机插入基因组，获得稳定遗传、无需持续筛选的株系；
  • 定点整合过表达：利用 CRISPR-Cas9 或同源重组将表达盒定向整合至基因组安全位点（如中性位点、必需基因下游），表达稳定且不影响菌株正常生长。

二、荧光标记菌株示例

荧光标记细菌菌株
图 1　沙门氏菌 mCherry 标记株与罗尔斯顿菌 GFP 标记株荧光成像。

三、可承接菌株范围

革兰氏阴性/兼性菌革兰氏阳性菌
假单胞菌链球菌
肺炎克雷伯菌乳酸菌
肠杆菌金黄色葡萄球菌
幽门螺杆菌芽孢杆菌
鲍曼不动杆菌谷氨酸棒杆菌
脆弱拟杆菌具核梭杆菌
牙龈卟啉单胞菌其他革兰氏阳性菌
大部分革兰氏阴性菌具体可咨询定制

四、交付内容

  • 重组表达载体图谱与序列；
  • 荧光/Western 验证报告（如适用）；
  • 甘油菌、冻存管及实验报告。

五、参考文献

  • Munir M T, Maneewan N, Pichon J, et al. Confocal spectral microscopy, a non-destructive approach to follow contamination and biofilm formation of mCherry Staphylococcus aureus on solid surfaces. Scientific Reports, 2021, 11(1): 15574.
  • Ellen L Lagendijk, et al. Genetic tools for tagging Gram-negative bacteria with mCherry for visualization in vitro and in natural habitats, biofilm and pathogenicity studies. FEMS Microbiology Letters, 2010.
  • Jones K R, Belvin B R, Macrina F L, et al. Sequence and characterization of shuttle vectors for molecular cloning in Porphyromonas, Bacteroides and related bacteria. Molecular Oral Microbiology, 2020, 35(4): 181-191.
  • 李舜岩, 李由然, 石贵阳. 地衣芽孢杆菌 9945a 转运蛋白 YdgF1 的功能鉴定. 微生物学报, 2023, 63(4): 12.
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