细胞膜蛋白 Pulldown 与宿主互作分析
致病性细菌或真菌通过哪些效应蛋白靶向宿主细胞的应答因子，是微生物领域的研究热点。锐志魔方现已建立高效、成熟的细胞膜蛋白 pulldown 技术服务体系，可在机制层面为用户提供病原菌与宿主相互作用机制的深度解析。
技术流程
- 裂解并获得目标宿主细胞膜蛋白。
- 利用 EZ-Link Sulfo-NHS-LC-生物素对细胞膜蛋白进行生物素化修饰。
- 将标记后的宿主细胞膜蛋白与病原菌菌体蛋白孵育并进行 pulldown。
- 结合质谱技术鉴定捕获的潜在效应蛋白。
- 通过 GST pulldown、siRNA 沉默、敲除株构建及 Western blot 等手段进行验证。
典型案例思路
以咽峡炎链球菌（Streptococcus anginosus）研究为例，通过细胞膜蛋白 pulldown 技术从菌体蛋白中筛选到表面膜蛋白 TMPC；进一步利用 GST-TMPC 与胃上皮细胞蛋白 pulldown-MS 鉴定出潜在受体因子 ANXA2；并通过敲除株构建与动物模型验证，证明 TMPC-ANXA2 互作通过 MAPK 信号通路促进胃黏膜病变。
服务价值
- 高通量筛选病原微生物效应蛋白与宿主应答因子。
- 为病原菌致病机制、药物靶点筛选及防治策略研究提供线索。
- 可与基因编辑、转座子文库、动物模型等服务组合形成完整证据链。