时间-浓度杀菌曲线（Time-kill）

MIC 与 MBC 是单点终点，而时间-浓度杀菌曲线（Time-kill curve）给出 0–24 h（甚至 48 h）内菌量的连续变化，直接回答“杀得有多快、是否再生、浓度是否足够”。它是优化给药方案、判断杀菌 / 抑菌属性及联合用药协同/拮抗的关键。

一、方法原理

Time-kill 实验先通过微量肉汤稀释法获得 MIC 与 MBC，随后设置 0.5×MIC、1×MIC、2×MIC、4×MIC、8×MIC 等系列浓度，于 0、2、4、6、8、10、24 h 等时间点取样，经梯度稀释后涂布平板计数，以 lgCFU/mL 对时间作图。

二、实验流程

1. 以肉汤稀释法测定受试菌对药物的 MIC 与 MBC；当 MBC/MIC ≤ 4 时认为药物具有杀菌作用；
2. 配制含 0.5MIC、1MIC、2MIC、4MIC、8MIC、16MIC、32MIC 的菌液，同时设未加药生长对照；
3. 振荡培养，在设定时间点取样，梯度稀释后涂布无药平板过夜培养；
4. 拍照计数，绘制以时间为横轴、lgCFU/mL 为纵轴的杀菌曲线；
5. 判定：与 t₀ 相比，细菌存活数下降 ≥3 lgCFU/mL 认为该浓度具有杀菌作用。

三、结果判读与应用

• 杀菌 / 抑菌属性：杀菌曲线下降至检测下限并保持，为杀菌；持续平行于对照则为抑菌；
• 3-log / 4-log 杀灭时间：常用于表述药物达到杀灭 99.9% 或 99.99% 所需时间；
• 联合用药验证：与单药 time-kill 比较，判断协同、相加或拮抗；
• 给药方案参考：帮助确定给药间隔与维持浓度。

四、参考文献

• Peck K R, et al. In vitro time-kill studies of antimicrobial agents against blood isolates of imipenem-resistant Acinetobacter baumannii. J Med Microbiol, 2012.
• Foerster S, et al. Time-kill curve analysis and pharmacodynamic modelling for in vitro evaluation of antimicrobials against Neisseria gonorrhoeae. BMC Microbiol, 2016.

典型项目经验