XTT 活性检测 / 结晶紫生物膜定量 / 生长曲线分析

XTT 比色法、结晶紫染色与生长曲线分析是抗菌药物评价的三大互补工具：XTT 反映生物膜或浮游菌的代谢活性，结晶紫定量生物膜总量，生长曲线则描绘药物对微生物生长动力学的影响。锐志魔方配备 BIOSCREEN C PRO 全自动生长曲线分析仪，可实现高通量、长时间自动监测。

一、XTT 比色法：活菌代谢活性

XTT（二甲氧唑黄）在电子耦合剂存在下，被活菌中与辅酶 II 相关的脱氢酶还原为水溶性橘黄色甲臜，在 450 nm 处定量。与 MTT 相比，XTT 产物可溶，无需有机溶剂溶解，更适合 96 孔板高通量筛选。

二、结晶紫染色：生物膜总量半定量

结晶紫可与生物膜内细胞及胞外基质结合，经甲醇固定、染色、漂洗后，用 33% 冰醋酸溶解，在 590 nm 读数，获得生物膜相对总量。该方法简便、重复性好，常与 XTT 活性法、活死染色相互印证。

三、生长曲线分析（BIOSCREEN C PRO）

微生物生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。通过比较药物处理组与对照组的生长曲线，可确定药物最佳作用时间、延长调整期、影响进入平台期的时间或最终生物量。BIOSCREEN C PRO 可自动完成培养、振荡与 OD 监测，实现多条件并行。

四、应用方向

• 抗菌药物 IC₅₀ 与细胞毒性快速筛选；
• 生物膜内菌体活性与总量联合评价；
• 不同培养基、温度、pH、盐浓度下的生长动力学比较；
• 杀菌曲线实验中最佳作用浓度与时间点的预筛选。

典型项目经验